Niveles de Organización de la Materia:
Subatómico < Atómico < Molecular (Agua) < Macromolecular (ADN) < Macromolecular complejo (Ribosomas o Glucoproteínas) < Subcelular (organelas) < Celular < Tejidos < Órganos < Animales y Plantas < Población (Individuos de la misma especie) < Comunidad (Conjunto de distintas poblaciónes) < Bioma (Ecosistema) < Biosfera (Todos los seres vivos).
Características de los seres vivos:
Metabolismo, Homeotasis (capacidad de mantener su medio interno relativamente constante), Irritabilidad (Reaccion ante estímulos internos o externos), Evolución y Adaptación, Reproducción, Crecimiento y Autopoyesis (Capacidad de generar sus propios componentes).
Clasificación en Reinos:
Moneras (Bacterias): Procarionte, Autó Y Heteró , Celulas. (ADN desnudo y ubicado en el citoplasma, Ausencia de núcleo, de sistema de endomembranas y de compartimientos).
Protistas (Algas): Eucarionte, Autó Y Heteró, Celulas.
Hongos: Eucarionte, Heteró, Celulas y Tisular (tejidos).
Vegetales: Eucarionte, Autó, sistema de órganos (plantas).
Animalia: Eucarionte, Heteró, Tejidos hasta Animales.
Virus: Complejos de Macromoléculas, están formados por una cápsula proteica, una molécula de ADN ó de ARN y pueden tener una cubierta membranosa. Se reproducen por Ciclo Lítico y no tienen la capacidad de metabolizar ni de sintetizar proteínas por si solos, por esto necesitan infectar una célula para sintetizar sus proteínas y para reproducirse (La única característica que comparten con los seres vivos es la presencia de ácidos nucleicos y proteínas).
OBS:. Las bacterias se dividen por fisión binaria; características exclusivas de las células procariotas es poseer ribosomas 70S en el citoplasma; Los virus, viroides y priones comparten la característica de ser agentes patógenos; Los viroides poseen una molécula de ARN y los virus de ARN o ADN, ya los priones no; Todos los seres vivos son sistemas abiertos; Las células animales y vegetales tienen en común solamente las siguientes organelas: REL, REG y Mitocondrias; Las paredes celulares de los vegetales están compuestos de celulosa y la de los hongos de quitina.
Biomoléculas:
Glucidos (Hidratos de Carbono): Aldosas y Cetosas (solubles en agua)
Monosacáridos importantes: Hexosas (Glucosa, Fructosa y Galactosa) y Pentosas (Desoxi-ribosa (componente del ADN) y ribosa (ARN)).

Disacáridos: Monómeros ligados por uniones covalentes llamadas Glucosídicas (Sacarosa, Lactosa y Maltosa).
Oligosacáridos: Monómeros unidos entre sí junto a lípidos o proteínas formando glucoproteína o glucolípido (Participan de reconocimiento de sustancias en la membrana plasmática).
Polisacáridos: Polímeros de glucosa para reserva energética o función estructural (Glucógeno en el higado de los animales, Celulosa para la pared celular de los vegetales y Almidón para la reserva energética de los vegetales).
Un homopolisacárido que tiene la función de reserva energética en las células vegetales es la amilopectina.

Lípidos: No solubles en agua, forman la estructura básica de TODAS las membranas biológicas y poseen múltiples funciones, desde almacenar energía hasta funciones complejas como hormonales, vitamínicas y etc.
Ácidos grasos: ácido carboxilo + una cadena de C e H, son anfipáticos (no forman puentes de H con el agua), pueden ser saturados (cadena de enlaces simples, solidos a temperatura ambiente y forman las grasas) o insaturados (cadena de enlaces dobles y/o triples, son líquidos como los aceites vegetales).
Acilglicéridos: Son lípidos insolubles en agua, formados por la unión entre el glicerol (poli alcohol) y tres ácidos grasos y funcionan como reserva energética y aislantes térmicos, forman los aceites y grasas (mas común Triglicérido)
Fosfoglicéridos: glicerol + 2 moléculas de ácido graso + 1 de fostato + 1 alcohol, son anfipáticas con porciones polares (cabeza hidrofilica) y no polares (Son el principal componente estructural de las membranas celulares)
Los fosfolípidos forman bicapas en agua que pueden unirse por sus extremos y formar vesículas cerradas llamadas liposomas que actúan como transporte adentro de la célula.
Esteroides: Son lípidos derivados de una estructura de 4 ciclos, el más importante el Colesterol forma las hormonas sexuales, ácidos biliares, pigmentos, vitaminas y etc.
El colesterol también es integrante de las membranas biológicas y se ubica entre los fosfolípidos regulando la fluidez de los mismos.
Terpenos: Tienen la función en intervenir en la formación de la coenzima Q, de vitaminas liposolubles y de pigmentos de vegetales. También actúa como anti-oxidante protegiendo las células.
OBS:. Todos los lípidos son biomoléculas no poliméricas; Un esteroide y un triglicérido tienen en común que son moléculas hidrofóbicas; Los polisacáridos de reserva más importante són amilosa, amilopectina y glucógeno.
Proteínas: Polímeros de Aminoácidos; Esta formado por 1 grupo Amino + 1 grupo Carboxilo + Grupo Variable
Actúan como transporte de moléculas o iones, estructurales o contráctiles, hasta funciones de receptores o reguladores de la fluidez del citoplasma.
Las proteínas están formadas por enlaces peptídicos, lo importante es saber que cualquier alteración en la secuencia de aminoácidos (aa), incluso la sustitución de un solo aa por otro, produce alteraciones de diferente importancia en las proteínas. Todas las proteínas tienen estructura primaria; La función de las proteínas está asociada a su estructura. Si pierde por alguna razón alguna de sus niveles estructurales, deja de funcionar, es decir, pierde su actividad biológica.
Cuando una proteína se desnaturaliza pierde sus niveles estructurales, perdiendo su función y la desnaturalización no afecta el enlace peptídico, es decir, la proteína no pierde su estructura primaria (Puede ocurrir por Tº y PH).

Hemoglobina y Mioglobina: Los dos son proteínas con estructura cuaternaria, tienen la función de transportar O2 por la sangre (Hb en los glóbulos rojos) y en los músculos esqueléticos (Hemo de la Mb).
La Mb tiene mayor afinidad por el O2 (Se satura con menor presión del gas).
La afinidad de la Hb por el O2 disminuye ante: aumento de la TºC; aumento de CO2 y Aumento de los [H+]
Cuando existe mayor cantidad de CO2 en la sangre la Hb libera el O2 y agarra el CO2 para llevarlos a los pulmones.

Nucleótidos: Están formados por una base nitrogenada + 1/2/3 grupos fosfatos + una ribosa (ARN) o desoxirribosa (ADN) que son Pentosas (azúcares monosacáridos).
Pueden estar libres en la célula transportando electrones, protones y/o energía. El nucleótido libre más importante es el ATP (Adenosín Tri Fosfato), también otros importantes para la respiración celular y fotosíntesis son el NAD y el FAD.
El ADN y ARN están formados por largas cadenas llamadas Polinucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster.

ARN: Existen tres tipos de ARN: el ARNm; el ARNt y el ARNr.
El ARN se sintetiza en el núcleo y tiene actividad biológica en el citoplasma de la célula.
ARNm es un polinucleótido que tiene como función llevar la información de la estructura primaria de la proteína desde el ADN hasta los ribosomas, que constituyen el sitio donde se sintetizan las proteínas.
El ARN de transferencia (ARNt) es una cadena (polinucleótido) plegado que se une de manera específica a los aminoácidos que transporta. Los lleva desde el citoplasma hasta los ribosomas.
El ARN ribosomal (ARNr) constituye cadenas que se unen a proteínas para formar las dos subunidades del ribosoma (mayor y menor). Ambas subunidades se unen en el citoplasma en el momento de sintetizar una proteína.

ADN: Está formado por dos cadenas de nucleótidos unidas por las bases.
Bases A, T, G, C y son complementarias; Son unidas por puentes de Hidrógeno.

OBS:. Solo el ARNr está asociado a proteínas; El ADN no abandona el núcleo.

Reacciones metabólicas:
Pueden ser Exergónicas (La energía de los reactivos es mayor que de los productos, liberan energía y son espontáneas) o Endergónicas (La energía de los reactivos es menor que de los productos, requieren energía).

Metabolismo: Seres vivos realizan metabolismo (Intercambio de materia y energía con el medio ambiente) que pueden ser Catabolismo (Ruptura de moléculas complejas en moléculas más simples; Exergónicas) o Anabolismo (Fabricación de moléculas complejas a partir de moléculas más simples; Endergónicas).
ATP (Para reacciones anabólicas) ↔ ADP + P (Para reacciones catabólicas)
El ATP es el intermediario que transporta en sus enlaces de alta energía, la energía liberada por la ruptura de uniones químicas en las reacciones catabólicas. La lleva a las reacciones anabólicas, que la requieren para la formación de nuevos enlaces químicos.

Enzimas: Son proteínas, se unen a un determinado Reactivo (Sustrato) en el Sitio Activo, actúan en bajas concentraciones, pueden ser reutilizadas y modifican solamente la Energía de Activación o Ea (NO el Ei ni el Ef).
Pueden ser simples o Conjugadas (Con un Ión o con una Molécula dando origen a una Coenzima)
Cinética enzimática: Saturación es cuando la actividad enzimática alcanza la velocidad máxima.
Km es la concentración de sustrato a la que la enzima alcanza la mitad de la velocidad máxima. Indica la afinidad de la enzima por el sustrato.
Influenzas: PH (Cada enzima tiene un PH óptimo para su actividad); TºC (óptimo también pero la velocidad máxima y la temperatura son proporcionales, pero poca temperatura = inactiva y muy alta = desnaturaliza); Concentración de Sustrato (Cuanto mayor sustrato mayor velocidad, pero para mayor velocidad de reacción después de la saturación de las enzimas solamente aumentando la concentración de enzimas).
Inhibición Competitiva: Es una molécula con estructura similar a la del sustrato que compite por el sitio activo, se une solo a la enzima libre, cambia el Km pero no la Vmax.
Inhibición NO Competitiva: Impide la formación de producto, se une a un lugar distinto del sitio activo de la enzima, cambia la Vmax pero no el Km (Al agregar exceso de sustrato, la Vmax no se modifica).
Enzimas Alostéricas: Poseen, además del Sitio Activo, Sitios Alostéricos a los que se unen moléculas Moduladoras, pueden ser tanto positivos (Aumenta la afinidad de la enzima por el sustrato) o negativos (Disminuye la afinidad de la enzima por el sustrato)
Los Moduladores modifican la velocidad de la reacción. Con enzimas alostérica se pueden regular las velocidades de las reacciones metabólicas de acuerdo a las necesidades de las células.
Enzima Inactiva + Kinasa (+ Fosfato) ↔ Enzima Activa + Fosfatasa (- Fosfato)
Isoenzimas: Suelen tener diferentes valores de Km, o propiedades de regulación diferentes como la CK.
La creatina quinasa (CK) es una enzima expresada por varios tejidos y tipos celulares. Cataliza la formación de fosfocreatina a partir de la fosforilación de una molécula de creatina (ácido orgánico nitrogenado).
Existe en forma de tres isoenzimas: CKB (cerebro); CKM (Musculos) y CKMT (Mitocondrias).

Características de la membrana celular: Compuesta por una bicapa lipídica (Fosfolípidos + Colesterol) + Proteínas + Oligosacáridos; Es Fluida, Asimétrica y también presenta Permeabilidad Selectiva.
Fluidez depende de: Tº(mayor, mejor fluidez); La presencia de lípidos insaturados de cadena corta favorecen el aumento de la fluidez y presencia de colesterol en las células animales disminuye la fluidez y regula la permeabilidad.
Proteínas de membrana: Integrales (Están entre los lípidos y suelen atravesar la bicapa lipídica, también son llamadas de Proteínas Transmembrana) y Periféricas (Están a un lado u otro de la bicapa lipídica y están unidas débilmente a las cabezas polares de la membrana o a otras proteínas)
Las proteínas tienen las funciones de transportar, unir (estructurar), receptar o función enzimática para adentro o para afuera de la célula.
Mecanismos de transporte: Pasivo (A favor de un gradiente de concentración y no requiere gasto de energía) y Activo (Contra un gradiente de concentración con gasto de energía como la bomba de Na+/K+ -ATP-asa).
Transportes Pasivos: Difusión simple (Desplazamiento de partículas de mayor concentración a menor concentración, como gases, moléculas hidrofóbicas y moléculas polares pequeñas); Difusión facilitada (Misma cosa pero con la ayuda de una proteína transportadora (también llamadas Carriers, son para monosacáridos y aminoácidos) o canal (para iones)) y Osmosis (Es un proceso de difusión de un solvente por una membrana semipermeable desde una solución de menos concentración a otra más concentrada (Hipotónico hasta el Hipertónico), tiende a igualar la presión osmótica y las concentraciones intra y extra celular (Estado Isotónico)).
Transporte Activo: Primario (Energía derivada del ATP directamente empuja a la sustancia para el otro lado, como la bomba Na+/K+ en las neuronas) o Secundario (Son llamados también cotransporte, aprovechan la energía cinética de un gradiente iónico para transportar un segundo soluto contra un gradiente).
Transporte en Masa: Transporte de grandes partículas como la Endocitosis (La célula toma moléculas grandes o partículas de su medio externo, mediante la invaginación de la membrana celular y formación de vesículas intracelulares) y la Exocitosis (Mediante este proceso, las células vierten al exterior tanto deshechos como macromoléculas que producen en su interior: hormonas, enzimas, etc. En este caso, las vacuolas con las sustancias que se van a excretar se fusionan con la membrana celular desde el interior y expulsan el contenido).

Sistema de Endomembranas: Está compuesto por el Sistema Vacuolar Citoplasmático (S.V.C.) que contiene las siguientes organelas: Retículo Endoplásmico Rugoso (Esta compuesto de ribosomas en su membrana, tiene la función de elaboración de proteínas de secreción, de la membrana plasmática y de la membrana del R.E., también degrada algunas proteínas) y Liso (Tiene la función de producción de Lípidos, formación de fosfolípidos, detoxificación y acumulación de Ca++); Complejo de Golgi (Es el principal distribuidor de macromoléculas en la célula y algunas moléculas pasan por Golgi para completar su maduración); Lisosomas (Tienen la función de digestión celular y son originados en el Golgi) y los Peroxisomas (Su función es oxidar algunos compuestos utilizando O2 atmosférico, pero no son estructuras de producción energética).
Elaboración de Proteínas en el R.E.G.: 1: En el citosol, el ARNm se une a una subunidad del ribosoma y comienza la síntesis de la proteína con un Péptido Señal (PS) 2: El PS es reconocido por una Proteína de Reconocimiento del PS (PRPS) en el citoplasma 3: el PRPS se une a la Riboforina de la membrana del retículo 4: El PRPS se desprende 5: una enzima del retículo corta el PS 6: se continúa la síntesis de la proteína dentro del retículo 7: finaliza la sínteis y el ribosoma se desprende, volviendo al citoplasma 8: la proteína se pliega dentro del retículo.
Interacciones: Ribosomas del REG -> REG -> Golgi -> Vesículas de Secreción -> Proteína de Membrana/Secreción/Lisosomas; Ribosomas libres en el citoplasma -> Citoplasma -> Núcleo/Peroxisomas/Mitocondrias; Golgi -> Lisosoma Primario hace fusión con Partícula endocitada -> Lisosoma Secundario -> Digestión -> Cuerpo residual -> Membrana Plasmática (exocitosis).

Citosol Y Citoesqueleto: El citoplasma es compuesto por: Citosol (Matriz Celular; es donde contiene las enzimas, chaperonas, proteasomas (estructura proteica que degrada proteínas dañadas) y etc.); Citoesqueleto (Red proteica compuesta por microtúbulos, microfilamentos y filamentos intermedios); Ribosomas (Son compuestos por una subunidad mayor y una menor; Libres, en el REG o agrupado en poliribosomas; Síntesis de proteínas); Sistema de Endomembranas (SVC) y Organelas citoplasmáticas (mitocondrias, peroxisomas, cloroplastos y etc.)
Microfilamentos: compuestos por proteínas globulares (actina y miosina) y tienen la función de contracción muscular, movimientos citoplasmáticos, movimientos ameboides y forman las microvellosidades de las células instestinales.
Microtúbulos: Formados por monómeros de Tubulina (también una proteína globular), tienen un formato largo y hueco, componen los Centríolos de las células animales, el huso mitótico, las cilias y los flagelos (sirve de movimiento en algunas células); Tiene función estructural, de distribución y transporte en la célula.
Filamentos Intermedios: Compuesto por Queratina y otras proteínas, los filamentos intermedios otorgan resistencia mecánica a las células, intervienen en la uniones intercelulares y en la fijación de células a la matriz extracelular.

(Parte nro 11 aca)
Matriz Extracelular: Esta compuesta por secreciones de proteínas y polisacáridos y forman tejidos (Proteoglucanos + Fibroporteínas (colágeno y elastina) + Proteínas de adhesión (fibronectina y laminina)).

Fotosíntesis: Es la síntesis de compuestos orgánicos a partir de energía lumínica, consumiendo agua y dióxido de carbono para generar oxigeno y Glucosa, que después en la respiración celular será utilizada para generar ATP.

La organela responsable por la fotosíntesis son los Cloroplastos, aparece sólo en vegetales y algunos protistas, están compuestos por: Estroma (Exterior a la membrana tilacoidal, usa las moléculas de ATP de la etapa lumínica para convertir CO2 en carbohidratos. Tiene ribosomas y una molécula de ADN); Membrana Tilacoidal (Es donde es recolectada la energía luminosa por el pigmento verde y convertida en ATP); Grana (Pila de Tilacoides, compuestos por fosfolípidos y proteínas, capturan la luz para la fotosíntesis, sus membranas también tienen pigmentos) y las Membranas Interna y Externa (La externa permite la entrada y salida de moléculas del cloroplastos, y la interna es donde se encuentra la membrana tilacoidal).
El Ciclo de Calvin (también llamado Etapa Bioquímica) es donde se produce la síntesis de la glucosa, se necesita de ATP, del CO2 para formar la glucosa y de la NADPH+ para la formación de Gliceraldehído-3-fosfato (antes de la glucosa), el ión de H+ será desechado y el ADP + P+ con el NADP+ serán retornados a la etapa lumínica.

Respiración Celular: Consiste en el proceso reverso de la fotosíntesis, se utiliza el O2 y la Glucosa para formar CO2, agua (H2O) y Energía (ATP). Las moléculas de glucosas se oxidan en presencia de O2, liberando CO2 y perdiendo electrones junto con iones de hidrógeno (H+), mientras tanto el O2 se reduce en agua cuando adiciona H+.
Mitocondria: Organela responsable por este proceso, presentes en todas las células eucariontes, es compuesta por: Crestas (Invaginaciones de la membrana interna, aumentando la superficie de la membrana); Matriz (Rodeada por la membrana interna, contiene proteínas, ribosomas y ADN para la fabricación de algunas proteínas necesarias en la respiración celular) y dos membranas, la Interna (Contiene grandes moléculas proteicas que participan del proceso de respiración y de producción de ATP) y la Externa (Lisa y protectora, pero tiene poca resistencia al tráfico de sustancias entre el citosol y la mitocondria).
Todo comienza con la Glucólisis: es un proceso universal (ocurre en todas las células) y consiste en la partición de una molécula de glucosa en dos moléculas de ácido pirúvico, esta ruptura libera energía química contenida en los enlaces de la molécula, el proceso ocurre primero en el citoplasma de la célula.
Entonces el ácido pirúvico ingresa a la matriz de la mitocondria, cada ácido pierde un CO2 y pasa a ser un ácido acético, se agrega NAD+ para generar NADH por la oxidación del acético y se le une una molécula de Coenzima A, dando resultado el Acetil-CoA, que es necesario para ingresar al Ciclo de Krebs.
Ciclo de Krebs: Consiste basicamente en un conjunto de procesos que genera GTP, que será utilizado por las crestas de la mitocondria después en la cadena respiratoria para generar moléculas de ATP.
La Acetil-CoA se une al oxalacético que se encuentra en la matriz mitocondrial, y forman el ácido cítrico. Éste pierde un CO2 y un H+ que va al NAD+, conviertiéndode en alfa-cetoglutárico. Éste pierde otro CO2 y otro H+ y da energía para formar un GTP, convirtiéndose en succínico. Éste pierde dos H+ y forma el málico, que vuelve a perder H+ y regenera el oxalacético, que reinicia el Ciclo.
Formación de ATP: el ATPasa o ATP-sintetasa es una enzima compleja formada por nueve cadenas polipeptídicas diferentes. Forman un canal que permite el pasaje de protones desde el espacio intermembranas hacia la matriz de la mitocondria, que sirve para sintetizar el ADP + P en ATP localizado en las crestas de la mitocondria.


Fermentación: Es cuando hay respiración celular sin la presencia O2, las más importantes son: la Láctica (En ciertas bacterias, hongos y otras células, el piruvato producido por la glucólisis se transforma en ácido láctico al incorporar H+ del NADH2 en ausencia de oxígeno. El rendimiento energético es de 2 ATP por cada glucosa. El proceso ocurre en el citoplasma) y también la Alcohólica (En algunos organismos, el piruvato producido por la glucólisis pierde un CO2 y se transforma en acetaldehído. Luego incorpora H+ del NADH2 y se convierte en etanol. El proceso ocurre en el citoplasma, en ausencia de oxígeno y rinde 2 ATP por cada glucosa).

Núcleo y Cromosomas: El núcleo es el orgánulo más grande de la célula, es lugar de almacenamiento y Replicación de ADN, también es el lugar donde el ADN controla las actividades celulares y está compuesto por: Nucléolo (Es donde comienza el ensamblaje de los ribosomas (donde transcurre síntesis de las proteínas celulares)); Cromatina (Complejo de ADN y proteínas, son largas, delgadas y enmarañadas (eucromatina) pero en la división celular la cromatina se condensa en cromosomas (heterocromatina y heterocromatina constitutiva)); Lámina nuclear (Parte interna de la envoltura nuclear compuesta de filamentos intermedios, proporciona soporte mecánico a la envoltura que está unida y interactúa con la cromatina) y Envoltura nuclear con los poros nucleares (La envoltura nuclear consiste en una doble membrana compuesta de una bicapa lipídica que rodea al núcleo, los poros perforan la envoltura y comunican el interior del núcleo con el citoplasma, permitiendo también el transporte de algunas moléculas entre ellos (complejo del poro)).
Nucleosomas: En eucariontes, cada molécula de ADN está asociada a las Histonas, que forman los nucleosomas, enrollan al ADN en la Interfase de la división celular, después de la etapa S, el enrollamiento del ADN aumenta hasta que la molécula súper-enrollada forma una cromátida. Como el ADN se ha duplicado en la etapa S, la cromátida, con su duplicado, forma el cromosoma, observable durante la división celular.
Cromosomas: Está compuesto por dós cromatides hermanas ligadas por un centrómero, es la forma más enrollada del ADN, necesario para la división celular.

Transcripción y Traducción:
Genoma: Toda secuencia de ADN que puede ser transcripta y genera un producto con cierta función celular específica se denomina gen. La totalidad de información genética (genes) que posee un individuo o una especie se denomina genoma.
Transcripción: Consiste básicamente en la síntesis de ARN a partir de una molécula de ADN con la participación de una ARN Polimerasa ADN dependiente, esta sintetiza una cadena de ARNm cuyo inicio, terminación y secuencia de bases viene determinados por el propio gen.
Síntesis de ARNm: 1º ARN polimerasa se une a una región llamada Promotor (secuencia específica de bases con alta afinidad por la enzima); 2º La ARN polimerasa se desplaza sobre la cadena molde, recorriéndola en dirección 3' 5' o rio abajo, transcribiéndola a partir del nucleótido que el promotor señala, hasta que un gen entero se ha convertido en ARN; 3º Antes de salir del núcleo, se agrega una metil-guanosina (Cap) en el extremo 5’, una cola de hasta 200 ribonucleótidos de adenosina y la eliminación de los intrones (regiones que no intervienen en la síntesis proteica; Procariontes carecen de intrones) por el proceso de “splicing” resultando un ARNm maduro.
Transcripción en Procariontes y Eucariontes: La ARN Polimerasa en las procariontes consta de 5 subunidades, y el llamado Factor Sigma se junta al núcleo de estas subunidades dando inicio a la transcripción y es finalizada cuando una proteína denominada Rho se une al ARN lo separando del ADN. En eucariontes, existen tres tipos de ARN polimerasa (I transcribe ARNr; II transcribe ARNm y ARN pequeños y la III transcribe ARNt y algunos ARN pequeños también) formadas por varias subunidades que se unen a regiones específicas llamadas promotoras a través de péptidos llamados Factores de Transcripción. Diferencias: En procariontes solamente existe 1 tipo de ARN polimerasa, en procariontes NO requiere de factores de transcripción, la apertura del ADN es realizada por la propia ARN polimerasa (en eucariontes existe una enzima llamada Helicasa que hace esto) y la finalización es distinta y más simples, en eucariontes la señal de terminación suele ser una secuencia de adeninas o poliadenilación.
Código Genético: Universal (el mismo en todos los seres vivos (salvo pocas excepciones, en bacterias)); Degenerado (varios tripletes distintos codifican un mismo aminoácido (sinónimos)) y NO Ambiguo (cada triplete especifica a un solo aminoácido, no se producen solapamientos en el marco de lectura.)
Secuencia de Nucleótidos ↔ Secuencia de Aminoácidos
Codón (triplete de nucleótidos del ARNm) ↔ Anticodón (triplete de nucleótidos del ARNt)
Síntesis Proteica: Consiste en la Traducción de la información codificada en la secuencia de nucleótidos del ARNm, en la secuencia correspondiente de aminoácidos en una cadena polipeptídica, esto ocurre en los ribosomas. Se puede describir en 3 etapas, en todas requiere la presencia de factores.
INICIACION:1- El aminoacil ARNt iniciador se una a la subunidad menor por acción del factor iniciador con gasto de GTP. 2- Los ARNm se acopla a la subunidad menor con la participación de los factores de iniciación 4 y 3. El ARNm para unirse a la subunidad menor debe ser reconocido por la FI4, responsable de enlazarse a la CAP y a los nucleótidos contiguos del extremo 5' del mensaje.3- La subunidad menos se desliza sobre el ARNm hasta localizar al codón de iniciación AUG, en el cual el acoplamiento de bases codón-anticodón iniciador se produciría por un emparejamiento de bases que preceden a AUG del ARNm con el extremo 3' de la subunidad menor. 4- una vez acoplado se establece la pauta de lectura correcta para el resto de los codones que contenga la región codificadora del ARNm. 5- se liberan los FI y con la ayuda del FI5 se acopla la subunidad mayor, quedando el aminoacil-ARNt iniciador en el sitio P del ribosoma. Todas las proteínas recién sintetizadas tienen metionina con residuo amino terminal, que es siempre eliminada por una aminopeptidasa específica.
[En los eucariotas cada molécula de ARNm se sintetiza una sola cadena proteica. Los ARNm son monocistrónicos. En procariotas pueden originarse varias cadenas polipeptídicas a partir de un ARNm, por ser policistrónicos].
ELONGACION: 1- Una molécula de aminoacil ARNt ingresa al sitio A vacante del ribosoma, acoplándose por complementariedad de las bases al segundo codón del ARNm expuesto en ese lugar. Esta reacción requiere la intervención de un factor de elongación y GTP. 2- El aminoácido iniciador se desacopla del ARNt del sitio ', liberando energía que se utiliza en la formación del enlace peptídico entre los dos aminoácidos alineados. Esta reacción es catalizada por una peptidil transferasa integrante de la subunidad mayor. Como consecuencia el ARNt iniciador del sitio p queda sin aminoácido y el dipéptido resultante queda enganchado al ARNt del sitio A (peptidil ARNt). 3- El nuevo peptidil ARNt del lugar A es translocado al lugar P cuando el ribosoma se desplaza 3 nucleótidos a lo largo de la molécula de ARNm. Esta etapa requiere de energía y la presencia del factor EF2 (EFG en procariotas).
TERMINACIÓN: 1- La finalización de la síntesis proteica ocurre ante la llegada, al sitio A del ribosoma, de uno de los 3 codones stop estos son reconocidos por el factor de terminación eRF 1 (1 y 2 en procariotas). La eRF 1 modifica la actividad de la peptidil transferasa, la adicional agua al peptidil ARNt en lugar de un nuevo aminoácido.
2- Como consecuencia de esta reacción el polipéptido se desacopla del ARNt, liberándose en el citoplasma. El ARNm se desacopla del ribosoma y se disocian la dos subunidades.
La síntesis proteica consume más energía que cualquier otro proceso anabólico. Para cada enlace peptídico hay 3 enlaces de alta energía: uno en la activación del aminoácido, otro en la unión del aminoacil ARNt a la subunidad menor del ribosoma y el último en la translocación del ribosoma.
Polirribosomas: Se denomina así al grupo que traducen simultáneamente el mismo mensaje. Los ribosomas en esta unidad estructural operan independientemente sintetizando una cadena polipeptídica completa.
En los eucariotas la envoltura nuclear y la maduración que sufren los ARNm impiden su traducción inmediata, es decir es leído después de abandonar el núcleo a través de los poros nucleares. La traducción es post-transcripcional. En los procariotas la traducción es simultanea a la transcripción, esto es, mientras se está terminando de transcribir e extremo 3', el 5' libre del ARNm se asocia a un ribosoma y al ARNt iniciador comenzando la traducción.
La fidelidad de la traducción: La unión del aminoácido a su ARNt correspondiente o aminoacilación. En esta etapa la actividad correctora de las enzimas aminoacil-ARNt sintetasa minimizan los errores en la selección del aminoácido correcto. El apareamiento de la base codón-anticodón. En este punto de control participa el factor de elongación EF1 (EF-Tu en procariotas) que forma complejo con el aminoacil-ARNt-y el GTP. Este complejo y no el ARNt libre es el que se une al codón correspondiente en el ARNm.
Regulación de la Expresión Génica: En procariontes, tenemos el Operón Lac y el Operón Triptofano.

En eucariontes, tenemos los factores de transcripción (proteínas distintas de la ARNpolimerasa necesarias para iniciar la transcripción); Condensación del ADN (Heterocromatina; Las regiones de cromatina que están súper enrolladas no se transcriben); Secuencias y proteínas de control de Transcripción (Secuencias de ADN que aumentan/disminuyen la tasa de Transcripción) y la Metilación (Agregado de grupos –CH3 a la citosina, cuantos más grupos, menor posibilidad de expresión). También tenemos algunos Mecanismos de Control: a Nivel de ARNm (Los pre-ARNm tienen múltiples intrones por lo que pueden producirse distintos ARNm a partir de un mismo gen, combinando los sitios de corte 5´y 3´. Esta combinación de exones o splicing alternativo permite obtener distintos ARNm a partir de un mismo pre-ARNm); a Nivel de Traducción (En el citoplasma, la ferritina captura el hierro libre que resulta tóxico para la célula. En presencia de hierro libre, la ferritina se traduce en los ribosomas y puede cumplir la función de capturar dicho hierro. Cuando los niveles de hierro son bajos, se activa la proteína aconitasa, que se une al ARNm de la ferritina impidiendo su traducción) y a Post-traducción (Las chaperonas son proteínas que acompañan el plegamiento de las proteínas. También transportan polipéptidos desnaturalizados hasta las chaperoninas, donde se pliegan. Las proteínas que no vuelven a su estructura normal, serán destruidas por hidrólisis en los proteasomas (La ubiquitina es una proteína natural de las células eucariontes. Se une a otras proteínas “marcándolas” para su destrucción o proteólisis en el proteasoma. De esta forma, se realiza una regulación de la expresión génica a través de la eliminación o no de proteínas después de su traducción)).
Replicación de ADN: Consiste en la separación de las dos cadenas de ADN para dar lugar a nuevas dos cadenas idénticas, este proceso es semiconservativa, con cada cadena parental actuando de molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria, también decimos que es Bidirecional y Semidescontínuo, el proceso es el mismo para eucariontes y procariontes: 1º El ADN se desenrolla, y se rompen los PdH que ligan las dos cadenas, este proceso es ayudado por una enzima llamada Helicasa, después algunas proteínas llamadas SSBs evitan que las cadenas se vuelvan a unir, resultando en una Burbuja de Replicación, estas se forman en múltiples lugares a lo largo de la molécula de ADN, aumentando la velocidad de la replicación; 2º Después que las dos cadenas están separadas, entra la ADN Polimerasa de tipo III que es la responsable por replicar el ADN, la Hebra Condutora es la cadena que crece de modo continuo hacia la horquilla de replicación, entonces la ADN Polimerasa construye la nueva cadena en la dirección 5’ -> 3’, pero solo puede prolongar una cadena preexistente, entonces la ARN Polimerasa o Primasa coloca los primeros nucleótidos de la nueva cadena, resultando en lo que llamamos ARN Cebador proporcionando un extremo 3’ al que enlazarse; 3º Ahora la ADN Polimerasa sigue colocando los nucleótidos complementarios a medida que se desplaza por la dirección 5’ -> 3’ (La ADN polimerasa trae el siguiente Nucleótido Trifosfato complementario, ligando en el extremo 3’ el fosfato con un grupo –OH libre y rompiéndose el enlace entre los otros fosfatos liberando energía, esta es la energía necesaria para polimerizar la nueva cadena de ADN, después se forman PdH entre los nucleótidos) mientras lee la cadena molde en dirección 3’ -> 5’, mientras la hélice continúa abriéndose permitiendo a la hebra condutora crecer de modo continuo, en la dirección de la horquilla de replicación; 4º Más tarde, entra la ADN Polimerasa de tipo I que reemplaza el cebador de ARN por ADN; 5º Al mismo tiempo que la hebra condutora crece en modo continuo a la horquilla de replicación, la hebra rezagada (Es la nueva cadena que crece de modo discontinuo alejándose de la horquilla de replicación) sintetiza en la dirección opuesta, utilizando los mismos pasos anteriores, pero la hebra rezagada solo puede continuar si la horquilla de replicación se desenrollé, haciendo que sea discontinua, creando lo que llamamos de Fragmentos de Okazaki; 6º Entonces, la Ligasa cataliza la formación de enlaces fosfodiéster entre nucleótidos de distintos fragmentos (O sea, sella la unión entre los fragmentos de ADN), la replicación continúa de este modo a lo largo de la hebra rezagada, sintetizando fragmentos a medida que la hélice se desenrolla, la hebra rezagada es una copia exata de la otra cadena parental. Este proceso continúa en ambas direcciones hasta que la molécula completa de ADN ha sido replicada. Las burbujas continúan creciendo hasta que llegan a unirse y finalmente termina el proceso.

Ciclo Celular:

Ciclinas: Son proteínas de concentración variable involucradas en la regulación del ciclo celular, ellas forman complejos con enzimas quinasas dependientes de ciclinas (Cdks; Ellas tienen concentración constante o constitutivas) activando en estas últimas su función quinasa. Las ciclinas reciben su nombre en vista de que sus concentraciones varían a lo largo del ciclo celular; cuando su concentración es baja la función de su correspondiente quinasa dependiente de ciclina es inhibida. Ellas alteran un ciclo de síntesis con otro de degradación.
CDK 2 -> + Ciclinas G1 -> Cdk-ciclina (formando el Factor Promotor de la fase S o FPS) -> Degradación -> CDK 1 -> + Ciclinas mitóticas -> Cdk-ciclina (formando el Factor Promotor de la Mitosis o FPM) -> Entrada en Mitosis -> Degradación -> Cdk 2 (repetición del ciclo).

Regulación del Ciclo: Ciclinas + Cdk -> + ATP -> Kinasa Activa -> + Fosforila -> Complejo Rb-E2F -> Rb + E2F activo -> La E2F activo resulta en la síntesis de proteínas que hacen avanzar el ciclo.
Genes reparadores del ciclo de replicación celular: ADN dañado -> gen p53 -> p53 (Proteína factor de transcripción del gen p21) -> gen p21 -> p21 (Proteína inhibidora de Cdk2) -> Bloqueo de enzima de replicación de ADN -> 2 p21 + Ciclina + Cdk2 -> Resultando en la detención del ciclo.

División Celular: Las células procariontes se reproducen asexualmente por fisión binaria transversal. Al duplicarse el ADN las 2 copias del cromosoma se encuentran unidas a regiones especializadas de la membrana celular (mesosomas) las cuales se separan gradualmente por el crecimiento e invaginación de la membrana plasmática entre ellas. La fisión ocurre entre los sitios de unión de los cromosomas circulares, por la formación de un septo transversal constituido por membrana plasmática y pared celular. De esta manera cada célula hija adquiere un cromosoma que ya ha comenzado a replicarse nuevamente. La división de la célula procarionte ocurre rápidamente. En eucariontes se llama Mitosis. Es un tipo de división celular mediante la cual a partir de una célula madre se obtienen 2 células hijas idénticas entre sí. El material genético se ha duplicado previamente en la etapa S y por mitosis se separa por igual en 2 células, cada una con la misma información genética y por lo tanto con la misma cantidad de cromosomas. Consta de 2 subetapas: la cariocinesis y la citocinesis. La cariocinesis abarca la división del material nuclear para la formación de los núcleos hijos y la citocinesis es la separación del citoplasma para dar origen a las células hijas.
Cariocinesis: Consta de las 4 etapas llamadas Profase, Metafase, Anafase y Telofase (PRO|META|ANA|TE)
La profase ocurre cuando culmina G2, se produce la formación del huso, la desorganización del nucleolo y de la envoltura nuclear y el enrollamiento del ADN formando los cromosomas (Compuesto por 2 moléculas de ADN super enrollados llamadas Cromátidas, se juntan por el centrómero y tienen una estructura aplanada a ambos lados del centrómero llamada cinetocoro, donde se unirán los microtúbulos del huso mitótico (centrosomas)).
En la metafase los cromosomas quedan alineados en el plano ecuatorial por la unión de los microtúbulos cinetocóricos a la zona del al cinetocoro. Se ubican perpendiculares a las fibras del huso acromático.
En la anafase ocurre el acortamiento de los microtúbulos cinetocóricos posibilita la separación de las cromátidas hermanas idénticas. En la telofase las cromátidas llegan a los polos y se desorganizan los cinetocoros. La envoltura nuclear se vuelve a polimerizar. El ADN comienza a desenrollarse. Y finaliza el proceso con la Citocinesis, que produce el estrangulamiento del citoplasma debido a la formación de un surco en la zona ecuatorial, formado por la acción de los microfilamentos. Los cromosomas terminan de desenrollarse.
Meiosis: ocurre en células germinales, solo una vez, dando por resultado cuatro células hijas haploides. Consiste en dos divisiones nucleares sucesivas (meiosis I y II) precedidas de una única duplicación de ADN. Puede ocurrir en distintos momentos de la vida de los organismos: gametica, cigotica o esporica. La reproducción sexual es una fuente de variabilidad genética gracias a combinaciones que se llevan a cabo en la meiosis. Estas combinaciones aumentan las probabilidades de supervivencia de una especie en un ambiente con distintas variables. Las fuentes de variabilidades con la segregación independiente (anafase I o II), que es el azar, y el crossing over (profase I). Obviamente, la fecundación, al mezclar genes provenientes de dos individuos diferentes, también genera variabilidad y por último las mutaciones (este último también en asexual). Las etapas de la Meiosis I son: Profase I (Se organiza el huso meiótico a partir de los centríolos. Se desorganiza la envoltura nuclear. La cromatina comienza a condensarse de manera que se hacen evidentes los cromosomas. Se produce el apareamiento de los homólogos. Cada cromosoma se une estrechamente a su homólogo por una de sus cromátides. Se forman las tetradas o bivalentes, par de homólogos apareados. Entre las cromátides de los homólogos se podría llegar a producir, como no, el crossing-over o entrecruzamiento, que consiste en el intercambio de zonas homólogas (que involucran los mismos genes) entre cromosomas homólogos. Una de las consecuencias es la variabilidad genética ya que después de este hecho las cromátides hermanas ya no son idénticas. Luego, los pares de homólogos se unen a los microtúbulos del huso y comienzan a migrar); Metafase I (cromatina compactada al máximo. Los pares de cromosomas homólogos se alinean en el plano ecuatorial de manera que uno de los homólogos está orientado hacia un polo y el otro miembro del par está orientado hacia el polo opuesto); Anafase I (separan los cromosomas homólogos ya que cada uno se va hacia un polo diferente al azar) y Telofase I (se descondensa el ADN. Se reorganizan dos envolturas nucleares (una en torno a cada polo). Se desorganiza el huso meiótico). Resultado de la meiosis I: dos células hijas diferentes entre sí y diferentes a la célula original. Las células hijas tienen la mitad de cromosomas que la célula que les dio origen. Por eso decimos que la meiosis es una división reduccional.
Meiosis II: Profase II (se organiza el huso meiótico a partir de los centríolos. Se desorganiza la envoltura nuclear. La cromatina comienza a condensarse de manera que se hacen evidentes los cromosomas. Los cromosomas se unen por el centrómero al huso y comienzan a migrar); Metafase II (los cromosomas continúan migrando para finalmente disponerse alineados en el plano ecuatorial. Esto significa que cada cromosoma tiene una de sus cromátides orientada hacia un polo y la otra hacia el polo opuesto); Anafase II (se separan las cromátides al azar, migrando cada una hacia polos opuestos) y Telofase II (se descondensa el ADN. Se reorganizan dos envolturas nucleares (una en torno a cada polo). Se desorganiza el huso meiótico). Gametogénesis: proceso de formación de gametas.
OVOGENESIS: ocurre en los ovarios. Las células primordiales son las ovogonias (2n), estas duplican su ADN en el tercer mes de desarrollo fetal, originando ovocitos primarios (2n); al quinto mes comienza la meiosis I y al octavo se detiene en la profase I. En la pubertad se continua la meiosis I, y algunos ovocitos I se transforman en ovocitos II; otros en cuerpos polares. Los ovocitos II comienzan la meiosis II (queda frenada en la metafase II – ovulación) produciéndose el ovulo y un cuerpo polar. Solo se concluye la meiosis II si el ovulo es fecundado. ESPERMATOGENESIS: ocurre en los testículos, comienza en la pubertad. Las células primordiales son las espermatogonias (2n). En la pubertad duplican su ADN y se diferencian en espermatocitos I que, gracias a la meiosis I (separa homólogos), forman espermatocitos II (2 células haploides) no realizan citocinesis, realizan meiosis II en cada uno de sus núcleos, separa cromatides hermanas. Estos se convierten en espermatidas (4 células haploides), luego de la meiosis II. Las espermatidas sufren un proceso de maduración y diferenciación, y se transforman en espermatozoides (flagelados, poco citoplasmas = mas hidrodinámicos)
ALTERACIONES CROMOSOMICAS: Inversiones (el cromosoma se rompe en dos sitios y el fragmento del medio vuelve a fijarse pero de manera inversa. El cromosoma no puede aparearse con un homologo normal durante la meiosis. Lo que sucede es que las gametas tendrán una copia adicional o le faltaran dichos genes. Si la gameta es fecundada mostrara un desequilibrio cromosómico); Translocaciones (un fragmento de cromosoma se fija a otro. Generan grandes cambios. Pueden haber supresiones: perdida de una región del cromosoma; o duplicaciones: se repite cierto fragmento); Numéricas (no disyunción à pares de homólogos no se separan durante la meiosis I)

à Cromatides hermanas no se separan durante meiosis II

Puede no separarse algunas de las tetradas, los homólogos del par sin separar van juntos a la misma celular lo que no impide una meiosis II normal. Las gametas con el número cromosómico alterado se denominan ANEUPLOIDE à n+1 sobra un cromosoma

à n-1 falta un cromosoma



Trío de homólogos à normal + (n+1) = TRISOMIA

à normal + (n-1) = MONOSOMIA



Tipos de TRISOMIA: par sexual = XXY (hermafroditismo) o XYY (mas altura)

X0 detención del desarrollo genital en etapa juvenil.

Autosomas: par 21 = síndrome de down

Par 23 = síndrome de Patau no nace

Par 18 = Síndrome de Edwards no nace



Cuadro de texto: LEYES DE LA HERENCIA: MENDEL

Primera Ley: principio de segregación.

Todo individuo tiene un par de alelos para cada rasgo o gen que se segregan durante la meiosis. Cuando los alelos son idénticos, el organismo es homocigota. Si son diferentes es heterocigota para esta característica. El genotipo existe en cada alelo como una unidad discreta que se expresa con letras según su grado de ploidia. La interacción de los genes con el ambiente y su expresión es el fenotipo. Si son distintos puede ocurrir:

Dominación completa: uno domina sobre el otro inhibiendo su acción.
Dominación incompleta: los rasgos parecen mezclarse obteniendo un fenotipo intermedio.
Codominancia: los dos alelos dominan por igual y se expresan ambos con la misma intensidad. Sucede por ejemplo, con los grupos sanguíneos.
Cruzamiento prueba: en la dominancia completa no es posible conocer el genotipo del individuo ya que puede ser homocigota o heterocigota. Para averiguarlo se realiza un entrecruzamiento entre el individuo de fenotipo dominante con un homocigota recesivo.

Herencia ligada al cromosoma X: sucede porque en el cromosoma X se encuentra mucha información genética. Si bien las mujeres heredan dos, el hombre hereda solo un cromosoma X por que tiene una sola copia de todos esos alelos. Esta característica se llama hemicigota. Si hay un alelo anormal en dicho cromosoma, siempre se expresara en el hombre. En cambio la mujer puede ser simplemente portadora.



Segunda Ley: transmisión independiente.

Dos genes tienen que ser independientes, cada uno tiene que tener información sobre genotipo diferente. Tienen que estar ubicados en cromosomas homólogos distintos. Si los genes están ligados voy a obtener dos pares de gametas, excepto que se produzca un crossing – over y se podrían obtener 4 gametas diferentes.

EVOLUCION



Creacionismo: seres vivos creados por ser superior.

Fijismo: especies no cambian.



Lamarck



ü El origen de un nuevo órgano o transformación es motivado por una necesidad que provoca un “impulso interno” que conduce a formar ese órgano.

ü El uso o desuso de las partes del organismo conduce a su mayor o menor desarrollo o inclusive a su desaparición.

ü Los cambios o modificaciones adquiridas a lo largo de la vida de un individuo, se transmiten a la descendencia (herencia de los caracteres adquiridos).



Darwin – Wallace



ü Todos los individuos provienen de otros semejantes.

ü Todas las especies tienen un potencial reproductivo que les permitiría multiplicarse en forma geométrica, pero esto en la realidad no ocurre porque hay presiones ambientales. Los individuos producen más descendencia que la que puede sobrevivir.

ü Las poblaciones mantienen constante el número de individuos durante largos períodos de tiempo.

ü los individuos de una misma especie no son todos iguales sino que presentan variaciones

ü entre los individuos de una población hay diferencias y ellas pueden heredarse

ü los individuos con variaciones favorables para cierto medio, tienen más ventajas que los demás. Tienen más posibilidades de sobrevivir y tendrán así más descendientes (que heredarán esas variaciones)

ü las variaciones favorables se acumulan a lo largo del tiempo por Selección Natural (el ambiente es la principal causa de selección natural). Las variaciones desfavorables se irán eliminando.

Gradualismo: la transformación se da en forma gradual.



Teoría Sintética de la evolución



Básicamente, de la combinación entre la teoría darwinista, los principios de Mendel, la genética moderna, la paleontología y la bioquímica, surge la Teoría Sintética de la evolución. Proponen como los principales motores del cambio evolutivo a las mutaciones, la recombinación génica y la selección natural.

Postula fundamentalmente que:

ü La variabilidad genética se debe principalmente a las mutaciones (en los individuos de reproducción asexual) y a la recombinación genética en los de reproducción sexual.

ü La selección natural actúa sobre la variabilidad genética

ü La evolución debe ser estudiada a nivel poblacional y no individual

ü La evolución se produce de manera gradual

ü La selección natural conduce a cambios en el pool de genes de la población

Factores que causan variabilidad genética

Mutación, cambios en la estructura y número de cromosomas (deleciones, inserciones, translocaciones, suplicaciones, errores en el crossing, aneuploidismo, recombinación genética).

Procesos que aumentan la variabilidad

Flujo génico y deriva génica.



Un concepto importante es el de pool génico o conjunto de genes de una población. Podemos definirlo como la suma de todos los alelos de todos los genes de todos los individuos de una población. El pool génico define y caracteriza a una población.

Entonces, para esta teoría la evolución es el resultado de los cambios acumulativos en el pool génico a lo largo del tiempo.



Efecto fundador: De una población se separa un grupo más pequeño (genéticamente representativo o no). En esta nueva población más pequeña, algunos alelos raros pueden quedar representados en exceso, aumentando así su frecuencia, y otros alelos pueden estar totalmente ausentes.

Cuello de botella: se reduce notablemente el número de individuos que componen una población debido a cuestiones drásticas (inundaciones, erupciones volcánicas, terremotos, etc.) y no por la selección natural.



Teoría neutralista: se oponen a los seleccionistas, son más importantes los cambios por deriva génica. Genes que cambian no tienen ni más ni menos ventajas que los genes que los sustituyen.



Teoría saltacionista: los procesos microevolutivos son independientes de los macroevolutivos. Se oponen al gradualismo. Mayor incidencia del azar que de la selección natural. El ritmo de la evolución no es gradual sino que procede a saltos.